مصنوعات

پروٹین فاسفوریلیشن نیٹ ورکس کی بہت زیادہ پیچیدگی کی وجہ سے پروٹوم وسیع فاسفوریلیشن واقعات کا تجزیہ اب بھی ایک بڑا تجزیاتی چیلنج ہے۔اس کام میں، ہم Lys-N، Lys-C، اور ٹرپسن کی تکمیل کا اندازہ ان کی فاسفوپروٹیوم کے عالمی تجزیہ میں حصہ ڈالنے کی صلاحیت کے حوالے سے کرتے ہیں۔کم پی ایچ مضبوط کیشن ایکسچینج کا ایک بہتر ورژن N-terminally acetylated، phosphorylated، اور nonmodified peptides کو مؤثر طریقے سے الگ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔تین خامروں کے امتزاج کا استعمال کرتے ہوئے کل 5036 غیر ضروری فاسفوپیپٹائڈس کی شناخت 1 ملی گرام پروٹین سے <1% کی غلط دریافت کی شرح کے ساتھ کی جا سکتی ہے۔ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ مختلف پروٹیز کے ساتھ پیدا ہونے والے فاسفوپیپٹائڈ ڈیٹا سیٹس کے درمیان اوورلیپ معمولی تھا، جب کہ اسی طرح سے تیار کردہ دو ٹرپٹک ڈیٹا سیٹس کے درمیان اوورلیپ کم از کم 4 گنا زیادہ پایا گیا۔اس طرح، Lys-N اور trypsin کے متوازی استعمال نے صرف ٹرپسن کے مقابلے d کے مقابلے میں پائے جانے والے فاسفوپیپٹائڈس کی تعداد میں 72 فیصد اضافہ کیا، جب کہ ٹرپسن کی نقل تیار کرنے والے تجربے سے صرف 25 فیصد اضافہ ہوا۔اس طرح، جب مکمل طور پر ٹرپسن اور Lys-N ڈیٹا پر توجہ مرکوز کرتے ہوئے، ہم نے 4671 غیر ضروری فاسفوپیپٹائڈس کی نشاندہی کی۔پتہ چلنے والی سائٹوں کے مزید تجزیے سے معلوم ہوا کہ Lys-N اور trypsin ڈیٹا سیٹس کو نمایاں طور پر مختلف فاسفوریلیشن شکلوں میں افزودہ کیا گیا ہے، مزید یہ کہ ملٹی پروٹیز نقطہ نظر فاسفو پروٹوم تجزیوں میں بہت قیمتی ہیں۔