مصنوعات

Eukaryotic خلیات میں چار deoxyribonucleoside triphosphates (dNTPs) کی منٹ کی مقدار کا ایک نازک توازن ہوتا ہے، جو صرف چند منٹوں کے DNA کی نقل کے لیے کافی ہوتا ہے۔ایک ہی ڈی این ٹی پی کی کمی اور اضافی دونوں کے نتیجے میں اتپریورتن کی شرح میں اضافہ، ڈی این اے کی خرابی یا مائٹوکونڈریل ڈی این اے کی کمی ہو سکتی ہے۔dNTPs کی مقدار عام طور پر ایک انزیمیٹک پرکھ کے ذریعہ کی جاتی ہے جس میں ڈی این اے پولیمریز کے ذریعہ تابکار ڈی اے ٹی پی (یا ڈی اے ٹی پی کے لئے پرکھ میں تابکار ڈی ٹی ٹی پی) کو مخصوص مصنوعی اولیگونوکلیوٹائڈس میں شامل کرنا نامعلوم dNTP کے ارتکاز کے متناسب ہوتا ہے۔ہمیں معلوم ہوا ہے کہ عام طور پر استعمال ہونے والا کلینو ڈی این اے پولیمریز نامعلوم ڈی این ٹی پی کے لیے متعلقہ رائبونیوکلیوٹائڈ کا متبادل ہو سکتا ہے جس کی وجہ سے بعض صورتوں میں ڈی این ٹی پیز کی بڑی حد سے زیادہ اندازہ لگایا جا سکتا ہے۔اب ہم ہر ڈی این ٹی پی کے لئے پرکھ کی شرائط بیان کرتے ہیں جو رائبونیوکلیوٹائڈ شامل کرنے سے گریز کرتے ہیں۔ڈی ٹی ٹی پی اور ڈی اے ٹی پی کے جائزوں کے لیے یہ کلینو انزائم اور لیبل والے ڈی اے ٹی پی (یا ڈی ٹی ٹی پی) کے ارتکاز کو کم کرنے کے لیے کافی ہے۔dCTP اور dGTP کے لیے ہمیں t he Klenow انزائم کو Taq DNA پولیمریز یا Thermo Sequenase سے تبدیل کرنا تھا۔ہم تجویز کرتے ہیں کہ کچھ پچھلی رپورٹوں میں رائبونیوکلیوٹائڈ شامل کرنے کی وجہ سے ڈی جی ٹی پی اور ڈی سی ٹی پی کی بہت زیادہ قدریں ہو سکتی ہیں۔