مصنوعات

5-fluorouracil (5-FU) اور دو endogenous monophosphate nucleotides کے متعدد میٹابولائٹس کی خاص طور پر مقدار درست کرنے کے لیے، ہم نے مائع کرومیٹوگرافی – ٹینڈم ماس سپیکٹومیٹری (LC-MS/MS) پر مبنی ایک اصل طریقہ تیار کیا۔اس پرکھ نے اس کے تعین کی اجازت دی: (i) 5-FU یا 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) سے 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) کی انٹرا سیلولر پیداوار۔ ، (ii) انٹرا سیلولر 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) تناسب پر 5-FdUMP ارتکاز کا اثر، اور (iii) 5-FdUMP کی سراو کی حد ABC ٹرانسپورٹرز کے ذریعہ انسانی ثقافتی خلیوں سے 5-FU۔ہمارے تجرباتی حالات کے تحت، خلیات 5-FU یا 5-FUrd کے ساتھ لگائے گئے تھے۔اس کے بعد، سیلولر پروٹین میتھانول کے ذریعہ تیار کیے گئے تھے۔یہ طریقہ کار اعلی نکالنے کی وصولی فراہم کرتا ہے.اس کے علاوہ، خلیوں سے 5-FU اور 5-FdUMP سراو کی پیمائش کرنے کے لیے، ہم نے ثقافت کے درمیانے درجے میں ان مالیکیولز کی مقدار درست کی۔میڈیا کو یا تو براہ راست انجیکشن لگایا گیا تھا (5-FU) یا Oasis Wax ایکسٹرکشن کارٹریج (5-FdUMP) کا استعمال کرتے ہوئے ٹھوس مرحلے میں نکالا گیا تھا۔تجزیہ کاروں کی علیحدگی ایک dC18 Atlantis 3.5 μm، (100 mm × 2.1 mm id) کالم پر امونیم فارمیٹ بفر/میتھانول/واٹر (5/5/90، v/v) کو موبائل فیز کے طور پر استعمال کرتے ہوئے آئیسکوکریٹک موڈ کے ساتھ کی گئی تھی۔رن ٹائم 6.2 منٹ سے زیادہ نہیں تھا۔تجزیہ کاروں کو منفی آئن موڈ کے تحت الیکٹرو سپرے انٹرفیس میں آئنائز کیا گیا تھا۔ہم نے مرکبات کے مطابق 2.5–150 ng mL −1 کی حد میں طریقہ کار کی توثیق کی۔سات دنوں کے دوران انٹرا اور انٹر اسے تغیر 10% سے کم تھا۔تمام مرکبات خلیات میں یا کلچر میڈیم میں مستحکم تھے جب نمونے −20 ° C پر کم از کم دو ہفتوں کے لیے ذخیرہ کیے گئے تھے، اور تین منجمد پگھلنے کے بعد۔دونوں میڈیا میں کوئی میٹرکس اثر نہیں دیکھا گیا۔