مصنوعات

پروٹین فاسفوریلیشن مختلف سیلولر افعال کو منظم کرتی ہے اور پودوں کی ابتدائی نشوونما میں کلیدی کردار ادا کرتی ہے۔Arabidopsis seedlings میں پروٹین فاسفوریلیشن کی پچھلی تحقیقات کی تکمیل اور توسیع کے لیے ہم نے ایک متبادل طریقہ استعمال کیا جو غیر منقطع حالات میں پروٹین کے اخراج کو غیر متحرک میٹل آئن انفینٹی کرومیٹوگرافی (IMAC) کے ساتھ جوڑتا ہے جو کہ Rubisco-depleted identifications کے بعد برقرار فاسفوپروٹینز کی افزودگی کے ساتھ۔ دو جہتی جیل الیکٹروفورسس (2-DE) اور مائع کرومیٹوگرافی-ٹینڈم ماس اسپیکٹومیٹری (LC-MS/MS) کا استعمال۔جیل میں ٹرپسن عمل انہضام اور منتخب جیل کے دھبوں کے تجزیے سے 144 فاسفوریلیٹڈ پیپٹائڈس اور باقیات کی نشاندہی کی گئی، جن میں سے صرف 18 فاسفوپیپٹائڈس اور 8 فاسفوسائٹس PhosPhAt 4.0 اور P3DB عربیڈوپسس تھیلیانا فاسفوری سائٹ میں پائے گئے۔82 شناخت شدہ فاسفوپروٹینز میں سے نصف سے زیادہ کاربوہائیڈریٹ میٹابولزم، فوٹو سنتھیس/سانس یا آکسیڈیٹیو سٹریس رسپانس میکانی ایس ایم ایس میں شامل تھے۔2-DE اور LC-MS/MS سے پہلے برقرار فاسفوپروٹینز کی افزودگی پیپٹائڈ سطح کی افزودگی کو استعمال کرنے والے طریقوں کے مقابلے میں فاسفوریلیٹڈ تھرونائن اور ٹائروسین کی باقیات کی کھوج میں اضافہ کرتی دکھائی دیتی ہے، یہ تجویز کرتی ہے کہ کورفوج سائٹ کے لحاظ سے دونوں نقطہ نظر کسی حد تک تکمیلی ہیں۔جوان پودوں کے نتائج کا موازنہ ان کے ساتھ جو پہلے بالغ عربیڈوپسس پتوں کے لیے حاصل کیے گئے تھے پانچ پروٹینوں کی نشاندہی کرتے ہیں جو ان بافتوں میں فاسفوریلیٹ ہوتے ہیں، جو پودوں کی نشوونما کے دوران پروٹین فاسفوریلیشن کی حرکیات کی تحقیقات کے لیے اس تکنیک کی صلاحیت کو ظاہر کرتے ہیں۔