مصنوعات

X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside کے لیے BCIG بھی مخفف ہے) ایک نامیاتی مرکب ہے جو galactose پر مشتمل ہوتا ہے جو ایک متبادل انڈول سے منسلک ہوتا ہے۔اس کمپاؤنڈ کو 1964 میں جیروم ہاروٹز اور اس کے ساتھیوں نے ترکیب کیا تھا۔ رسمی کیمیائی نام کو اکثر کم درست لیکن کم بوجھل فقرے جیسے بروموکلوروئنڈوکسائل گیلیکٹوسائڈ تک مختصر کیا جاتا ہے۔انڈوکسیل کا X X-gal کے سنکچن میں X کا ذریعہ ہو سکتا ہے۔X-gal کو اکثر مالیکیولر بائیولوجی میں ایک انزائم، β-galactosidase کی موجودگی کی جانچ کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، اس کے معمول کے ہدف کی جگہ، β-galactoside۔یہ ہسٹو کیمسٹری اور بیکٹیریاولوجی میں اس انزائم کی سرگرمی کا پتہ لگانے کے لیے بھی استعمال ہوتا ہے۔X-gal بہت سے indoxyl glycosides اور esters میں سے ایک ہے جو انڈگو ڈائی سے ملتے جلتے ناقابل حل نیلے مرکبات حاصل کرتے ہیں جو انزائم کیٹالائزڈ ہائیڈولیسس کے نتیجے میں حاصل ہوتے ہیں۔

X-gal لییکٹوز کا ایک ینالاگ ہے، اور اس لیے اسے β-galactosidase انزائم کے ذریعے ہائیڈولائز کیا جا سکتا ہے جو D-lactose میں β-glycosidic بانڈ کو بند کرتا ہے۔X-gal، جب β-galactosidase کے ذریعے کلیو کیا جاتا ہے تو اس سے galactose اور 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole پیدا ہوتا ہے - 1. بعد والا خود بخود ڈائمریز ہو جاتا ہے اور 5,5'-dibromo-4,4'-dihloro میں آکسائڈائز ہو جاتا ہے۔ -انڈیگو - 2، ایک انتہائی نیلے رنگ کی مصنوعات جو ناقابل حل ہے۔X-gal خود بے رنگ ہے، اس لیے نیلے رنگ کی مصنوعات کی موجودگی کو فعال β-galactosidase کی موجودگی کے ٹیسٹ کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔یہ بیکٹیریل β-galactosidase (نام نہاد lacZ ) کو مختلف ایپلی کیشنز میں بطور رپورٹر استعمال کرنے کی بھی اجازت دیتا ہے۔

دو ہائبرڈ تجزیہ میں، β-galactosidase کو ایک رپورٹر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے تاکہ ان پروٹینوں کی شناخت کی جا سکے جو ایک دوسرے کے ساتھ تعامل کرتے ہیں۔اس طریقہ میں، خمیر یا بیکٹیریل نظام کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کے تعامل کے لیے جینوم لائبریریوں کی اسکریننگ کی جا سکتی ہے۔جہاں پروٹینز کی اسکریننگ کے درمیان ایک کامیاب تعامل ہوتا ہے، اس کے نتیجے میں ایکٹیویشن ڈومین کو پروموٹر سے منسلک کیا جاتا ہے۔اگر پروموٹر ایک lacZ جین سے منسلک ہے تو، β-galactosidase کی پیداوار، جس کے نتیجے میں X-gal کی موجودگی میں نیلی رنگ کی کالونیاں بنتی ہیں، اس لیے پروٹین کے درمیان کامیاب تعامل کی نشاندہی کرے گی۔یہ تکنیک تقریباً 106 سے کم سائز کی لائبریریوں کی اسکریننگ تک محدود ہوسکتی ہے۔ X-gal کی کامیاب کلیویج بھی indole کے اتار چڑھاؤ کی وجہ سے نمایاں طور پر بدبو پیدا کرتی ہے۔

چونکہ X-gal خود بے رنگ ہے، اس لیے نیلے رنگ کی مصنوعات کی موجودگی کو ایک فعال β-galactosidase کی موجودگی کے ٹیسٹ کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔

ایک فعال انزائم کی یہ آسان شناخت βgalactosidase (lacZ جین) کے جین کو مختلف ایپلی کیشنز میں رپورٹر جین کے طور پر استعمال کرنے کی اجازت دیتی ہے۔