مصنوعات

Tris acetate نمک کثرت سے TAE (Tris-acetate-EDTA) بفر کی تیاری میں استعمال کیا جاتا ہے، جو چلتے ہوئے بفر کے طور پر اور agarose جیلوں میں استعمال ہوتا ہے۔Tris Acetate-EDTA بفر DNA agarose gel electrophoresis کے لیے استعمال ہوتا ہے لیکن RNA agarose gel electrophoresis کے لیے بھی استعمال ہوتا ہے۔ڈبل پھنسے ہوئے DNA دوسرے بفروں کے مقابلے TAE میں تیزی سے دوڑتے ہیں اور توسیع شدہ الیکٹروفورسس کے دوران ختم ہو سکتے ہیں۔توسیع شدہ الیکٹروفورسس کے دوران بفر گردش یا بفر کی تبدیلی کم بفرنگ کی صلاحیت کو دور کرسکتی ہے۔حل میں ڈی این اے کی نقل و حرکت کا مطالعہ کرنے کے لیے مختلف ارتکاز میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔چونکہ TBE بفر میں بوریٹ (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X Powder Pack, sc-296651) بہت سے انزائمز کے لیے ایک مضبوط رکاوٹ ہے، اس لیے DNA نمونے کے لیے انزیمیٹک ایپلی کیشنز کو دیکھتے وقت TAE بفر کی سفارش کی جاتی ہے۔ٹریس ایسیٹیٹ نمک بھی ایک بفر ہے جس میں فائر فلائی لوسیفریز کے ساتھ اے ٹی پی اسسیس میں اعلی حساسیت ہے۔

استعمال کرتا ہے: TAE چلانے والا بفر DNA ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے لیے سب سے زیادہ استعمال ہونے والا بفر ہے، اور مقامی RNA ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے لیے بھی استعمال ہوتا ہے۔ڈبل پھنسے ہوئے DNA دوسرے بفروں کے مقابلے TAE میں تیزی سے حرکت کرتے ہیں، لیکن طویل الیکٹروفورسس کے دوران بفر آئنوں کی کمی کی وجہ سے تیرنے میں بھی ناکام رہتے ہیں۔طویل الیکٹروفورسس کے دوران بفر سائیکلنگ یا بفر ایکسچینج کم بفر صلاحیت کی تلافی کر سکتا ہے۔2 40 mM Tris acetate اور 1 mM EDTA، pH 8.3 پر مشتمل 1 mMTAE بفر حاصل کرنے کے لیے مرتکز TAE بفر کو پتلا کریں۔1 ایم ایم ٹی اے ای بفر کو ایگروز جیل اور چلتے ہوئے بفر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔زیادہ سے زیادہ ریزولوشن کے لیے، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ لاگو وولٹیج 5V/cm سے کم ہو (یونٹ الیکٹروڈ کے درمیان فاصلہ)۔

ایپلی کیشن: TAE چلانے والا بفر کیمیکل بک جیل میں ڈی این اے ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے لیے سب سے زیادہ استعمال ہونے والا بفر ہے، اور یہ نان ڈینیچرنگ آر این اے ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے لیے بھی استعمال ہوتا ہے۔ڈبل پھنسے ہوئے DNA دوسرے بفروں کے مقابلے TAE میں تیزی سے حرکت کرتے ہیں، لیکن طویل الیکٹروفورسس کے دوران بفر آئنوں کی کمی کی وجہ سے تیرنے میں بھی ناکام رہتے ہیں۔طویل الیکٹروفورسس کے دوران بفر سائیکلنگ یا بفر ایکسچینج کم بفر صلاحیت کی تلافی کر سکتا ہے۔مرتکز TAE بفر کو 1 mMTAE بفر حاصل کرنے کے لیے پتلا کیا گیا تھا جس میں 40 mM Tris acetate اور 1 mM EDTA، pH 8.3 تھا۔1 ایم ایم ٹی اے ای بفر کو ایگروز جیل اور چلتے ہوئے بفر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔زیادہ سے زیادہ ریزولوشن کے لیے، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ لاگو وولٹیج 5V/cm سے کم ہو (یونٹ الیکٹروڈ کے درمیان فاصلہ)۔

استعمال کرتا ہے: فائر فلائی لوسیفریز کے ساتھ اے ٹی پی کا پتہ لگانے میں، یہ پروڈکٹ سب سے زیادہ حساس بفر ہے۔گلوٹامیٹ بائنڈنگ کا پتہ لگانا۔

غیر رسیپٹر مواد کے ساتھ [3H]l-glutamic ایسڈ کا بے گھر ہونا۔

مائکرو فیوج ٹیوبوں اور شیشے کے پابند L-glutamic ایسڈ کی چار بفروں میں چھان بین کی گئی۔ان مواد کے لیے پس منظر کی پابندی نہ ہونے کے برابر تھی، لیکن Tris-HCl اور Tris-citrate بفر میں سینٹرفیوگریشن یا سکشن کے ذریعے بڑھائی گئی۔یہ بائنڈنگ بہت کم تھی یا جب اس کی بجائے HEPES-KOH، یا Tris-acetate بفر استعمال کیا جاتا تھا۔مائکرو فیوج ٹیوبوں کے ساتھ L-گلوٹامیٹ بائنڈنگ کو L- لیکن گلوٹامیٹ اور اسپارٹیٹ کے D-isomers نے نہیں روکا۔DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic ایسڈ نے بھی بائنڈنگ کو نہیں روکا۔دیگر مرکبات جنہوں نے کم سے اعتدال پسند روک تھام ظاہر کی تھی: N-methyl-D-aspartate، quisqualate، L-glutamic acid diethyl ester، N-methyl-L-aspartate، kainate، اور 2-amino-4-phosphonobutyrate۔بائنڈنگ کو چوہے کی دماغی جھلیوں سے روکا گیا تھا۔ایک پروٹین پر منحصر [3H] گلوٹامیٹ بائنڈنگ بار بار منجمد پگھلی ہوئی جھلی کی تیاری کے ساتھ حاصل کی گئی تھی جب بائنڈنگ Tris-acetate بفر میں کی گئی تھی۔یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ Tris-acetate یا HEPES-KOH بفر کو گلوٹامیٹ بن ڈنگ پرکھ میں استعمال کیا جائے۔اگر Tris-HCl یا Tris-citrate بفر استعمال کیا جاتا ہے تو، مائکرو فیوج ٹیوبوں یا گلاس فائبر فلٹرز کے ساتھ منسلک ہونے کے لیے درست کرنے کے لیے مناسب کنٹرول تجربہ کیا جانا چاہیے۔