مصنوعات

مداری فائبرو بلاسٹس کا بالغ ایڈیپوسائٹس میں فرق اور اس کے نتیجے میں ایڈیپوز ٹشو کا جمع ہونا قبروں کی آربیٹو پیتھی (GO) کی ترقی میں دکھایا گیا ہے۔آٹوفیجی ایڈیپوجینیسیس میں شامل ہے، لیکن GO کی شروعات اور ترقی میں آٹوفجی کے کردار کے بارے میں بہت کم معلوم ہے۔اس مطالعے کا مقصد GO کے روگجنن میں آٹوفجی کے کردار کی چھان بین کرنا ہے۔ GO والے مریضوں اور عام مضامین کے ساتھ ساتھ الگ تھلگ مداری فبرو بلوسٹس کے Orbital adipose/connective tissue explants کا تجزیہ کیا گیا۔ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کے ساتھ یا اس کے بغیر فرق کرنے والے میڈیم کا استعمال کرتے ہوئے ایڈیپوجینیسیس کی حوصلہ افزائی کی گئی تھی، اور آٹوفجی کو بافیلومائسن A1 اور Atg5-ٹارگٹڈ شارٹ ہیئرپین RNA (shRNA) کا استعمال کرتے ہوئے جوڑ دیا گیا تھا۔الیکٹران مائکروسکوپی کے ذریعہ آٹوفاگوسوم کی شناخت کی گئی۔آٹوفجی سے متعلق جینز اور ایڈیپوجینیسیس سے متعلقہ ٹرانسکرپشن عوامل کے اظہار کا تجزیہ ریئل ٹائم ریورس ٹرانسکرپشن-پولیمریز چین ری ایکشن اور/یا ویسٹرن بلاٹ تجزیہ کے ذریعے کیا گیا۔لپڈ بوندوں کے جمع ہونے کی جانچ آئل ریڈ او سٹیننگ کے ذریعے کی گئی۔ آٹوفیجک ویکیولز GO سیلز میں نان GO سیلز (p <0.05) کے مقابلے زیادہ پائے گئے۔آٹوفجی سے متعلق جینوں کا اظہار بالترتیب GO ٹشوز اور خلیوں میں ان کے غیر GO ہم منصبوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا۔Interleukin-1β نے GO خلیوں میں LC3-II، p62، اور Atg7 پروٹین میں اضافہ کیا۔آٹوفاگوسوم جمع ایڈیپوجینیسیس کے 4 دن میں دکھایا گیا تھا اور لپڈ بوندوں کی تشکیل کے ساتھ ساتھ 10 دن تک کمی واقع ہوئی تھی۔LC3 اور p62 پروٹین کا اظہار تفریق کے 48 گھنٹوں کے اندر بڑھتا گیا اور 4 سے 10 دن تک بتدریج کم ہوتا گیا۔ Bafilomycin A1 علاج اور Atg5 knockdown by shRNA نے لپڈ بوندوں کے جمع ہونے کو روکا اور ایڈیپوجینک مارکروں کے دبے ہوئے اظہار کو روکا۔ آٹوفیجی کے مقابلے میں خلیوں میں ٹائیگو اور ٹائیگو فیجی میں اضافہ ہوا۔ غیر GO ٹشو اور خلیات، تجویز کرتے ہیں کہ آٹوفیجی GO روگجنن میں ایک کردار ادا کرتی ہے۔آٹوفجی ہیرا پھیری GO کے لیے علاج کا ہدف ہو سکتا ہے۔