مصنوعات

اینتھرانیلک ایسڈ اور فلوروسینس کا پتہ لگانے کے ساتھ ڈیریویٹائزیشن پر مبنی گلائکوسائلٹرانسفیریزس کے لیے نئی اعلی کارکردگی والی مائع کرومیٹوگرافی پرکھ۔

اعلی کارکردگی والے مائع کے ذریعہ β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) اور α2-6 sialyltransferase (ST-6) دونوں کی سرگرمیوں کی پیمائش کے لئے 2-aminobenzoic ایسڈ (2AA؛ اینتھرانیلک ایسڈ، AA) کی منفرد لیبلنگ کیمسٹری کا استعمال کرتے ہوئے اسسیس تیار کیا گیا تھا۔ فلوروسینس کا پتہ لگانے کے ساتھ کرومیٹوگرافی (HPLC) (Anumula KR. 2006. گلائکوپروٹین کاربوہائیڈریٹس کے اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافک تجزیہ کے لیے فلوروسینس ڈیریویٹائزیشن کے طریقوں میں پیشرفت۔ مقعد بائیو کیم۔ 350:1-23)۔N-Acetylglucosamine (GlcNAc) اور N-acetyllactosamine کو بالترتیب GalT-1 اور ST-6 کے عطیہ دہندگان کے طور پر قبول کرنے والے اور uridine diphosphate (UDP) -galactose اور cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic ایسڈ (NANA) کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔انزیمیٹک مصنوعات کو AA کے ساتھ سیٹو میں لیبل لگایا گیا تھا اور TSKgel Amide 80 کالم پر سبسٹریٹس سے عام مرحلے کے حالات کا استعمال کرتے ہوئے الگ کیا گیا تھا۔انزائم یونٹس کا تعین چوٹی والے علاقوں سے بیک وقت اخذ کردہ معیارات Gal-β1-4GlcNAc اور NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc کے ساتھ موازنہ کرکے کیا گیا تھا۔لکیریٹی (وقت اور انزائم کی حراستی)، صحت سے متعلق (انٹرا- اور انٹراسے) اور اسیس کے لئے تولیدی صلاحیت قائم کی گئی تھی۔اسیسز کو تنہائی اور طہارت کے دوران انزائم کی سرگرمیوں کی نگرانی میں کارآمد پایا گیا۔گداز انتہائی حساس تھے اور روایتی تابکار چینی پر مبنی پیمائش کے برابر یا بہتر کارکردگی کا مظاہرہ کرتے تھے۔پرکھ کی شکل کو دوسرے ٹرانسفراسیس کی سرگرمی کی پیمائش کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے، بشرطیکہ کاربوہائیڈریٹ قبول کرنے والے لیبلنگ کے لیے کم کرنے والے اختتام پر مشتمل ہوں۔آئی جی جی کا استعمال کرتے ہوئے گلائکوپروٹین قبول کرنے والوں کے لئے ایک پرکھ تیار کیا گیا تھا۔ایک مختصر HPLC پروفائلنگ کا طریقہ IgG glycans (bientennary G0, G1, G2, mono- اور disialylated) کی علیحدگی کے لیے تیار کیا گیا تھا، جس نے GalT-1 اور ST-6 سرگرمیوں کے تعین میں تیزی سے سہولت فراہم کی۔مزید برآں، پروفائلنگ کا یہ طریقہ کلینیکل سیٹنگز میں آئی جی جی گلائکینز میں ہونے والی تبدیلیوں کی نگرانی کے لیے کارآمد ثابت ہونا چاہیے۔