مصنوعات

دوسرے مثبت اسٹرینڈ آر این اے وائرسوں کی طرح، ٹومبو وائرس کو جھلی سے منسلک وائرل ریپلیکیس کمپلیکس (VRC) کے ذریعے نقل کیا جاتا ہے۔VRC p92 وائرس کوڈڈ RNA پر منحصر RNA پولیمریز (RdRp)، وائرل p33 RNA چیپیرون، اور متعدد شریک آپٹڈ ہوسٹ پروٹینز پر مشتمل ہے۔اس کے ترجمے کے بعد ایک فنکشنل RdRp بننے کے لیے، p92 ریپلیکیشن پروٹین کو VRC میں شامل کیا جانا چاہیے، اس کے بعد اس کا ایکٹیویشن ہونا چاہیے۔ہم نے پہلے سیل فری خمیر کے عرق پر مبنی پرکھ میں دکھایا ہے کہ ٹماٹو بشی اسٹنٹ وائرس (TBSV) RdRp کو چالو کرنے کے لیے ایک حل پذیر میزبان عنصر کی ضرورت ہوتی ہے۔اس آرٹیکل میں، ہم سیلولر ہیٹ شاک پروٹین 70 (Hsp70) کی شناخت ایک N-terminally truncated recombinant TBSV RdRp کو چالو کرنے کے لیے ضروری کو-آپٹڈ ہوسٹ فیکٹر کے طور پر کرتے ہیں۔اس کے علاوہ، Hsp70 فنکشن کی چھوٹی مالیکیول پر مبنی بلاکنگ وٹرو میں ٹومبو وائرس RdRp کے ذریعے RNA کی ترکیب کو روکتی ہے۔مزید برآں، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ غیر جانبدار فاسفولیپڈز، یعنی فاسفیٹائیڈیلتھانولامین (PE) اور فاسفیٹائیڈیلچولین (PC)، وٹرو میں RdRp ایکٹیویشن کو بڑھاتے ہیں۔اس کے برعکس، phosphatidylglycerol (PG) ان وٹرو RdRp ایکٹیویشن پر ایک مضبوط اور غالب روکنے والا اثر دکھاتا ہے۔ہم یہ بھی ظاہر کرتے ہیں کہ PE اور PC RdRp-viral plus-strand RNA [(+)RNA] کے تعامل کو متحرک کرتے ہیں، جبکہ PG وائرل RNA کو RdRp سے منسلک کرنے سے روکتا ہے۔tombusvirus RdRp ایکٹیویشن میں مختلف فاسفولیپڈز کے محرک بمقابلہ روکنے والے کرداروں کی بنیاد پر، ہم تجویز کرتے ہیں کہ ٹامبوس وائرس کے ذریعے ہدف شدہ ذیلی سیلولر جھلیوں کی لپڈ ترکیب کو انفیکشن کے دوران نئی VRC اسمبلی کو منظم کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ (RdRp)، جو متعدد مثبت اسٹرینڈ آر این اے وائرس کے متاثرہ خلیوں میں وائرل RNA اولاد کی ترکیب کے لیے ذمہ دار ہے، ابتدائی طور پر غیر فعال ہے۔اس حکمت عملی سے سائٹوسول میں وائرل آر این اے کی ترکیب سے بچنے کا امکان ہے جو تیزی سے آر این اے سے متحرک سیلولر اینٹی وائرل ردعمل کی شمولیت کا باعث بنے گا۔جھلی سے منسلک ریپلیکس کمپلیکس کی اسمبلی کے دوران، وائرل RdRp ایک نامکمل طور پر سمجھے جانے والے عمل کے ذریعے فعال ہو جاتا ہے جو RdRp کو RNA کی ترکیب کے قابل بناتا ہے۔TBSV RdRp کا استعمال کرتے ہوئے، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ مشترکہ طور پر منتخب کردہ سیلولر Hsp70 چیپیرون اور غیر جانبدار فاسفولیپڈز وٹرو میں RdRp کو چالو کرنے میں سہولت فراہم کرتے ہیں۔اس کے برعکس، phosphatidylglycerol (PG) کا ان وٹرو RdRp ایکٹیویشن اور RdRp-وائرل RNA تعامل پر ایک غالب روکا اثر ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ RdRp کے ارد گرد موجود جھلی دار مائکروڈومین RNA کی ترکیب کے لیے اس کی صلاحیت کو بہت زیادہ متاثر کرتا ہے۔اس طرح، وائرل RdRp کی ایکٹیویشن ممکنہ طور پر متاثرہ خلیوں میں متعدد میزبان اجزاء پر منحصر ہے۔