مصنوعات

کپوسی کے سارکوما سے وابستہ ہرپیس وائرس (KSHV) کا ORF45 پروٹین ایک گاماہرپیس وائرس سے متعلق فوری طور پر ابتدائی ٹیگمنٹ پروٹین ہے۔ہمارے پچھلے مطالعات نے KSHV انفیکشن کے ابتدائی اور آخری دونوں مراحل میں اس کے اہم کرداروں کا انکشاف کیا ہے۔اس مطالعے میں، ہم نے مونوکلونل اینٹی باڈیز کے پینل کا استعمال کرتے ہوئے ORF45 کے انٹرایکوم کا سروے کیا۔پہلے سے شناخت شدہ ایکسٹرا سیلولر ریگولیٹڈ کناز (ERK) اور p90 ribosomal S6 kinase (RSK) پروٹین کے علاوہ، ہمیں کئی دوسرے کوپریفائیڈ پروٹین ملے، جن میں ∼38 kDa اور ∼ 130 kDa کے نمایاں پروٹین بھی شامل ہیں۔ماس سپیکٹومیٹری نے انکشاف کیا کہ 38-kDa پروٹین وائرل ORF33 ہے اور 130-kDa پروٹین سیلولر USP7 (ubiquitin-specific protease 7) ہے۔ہم نے ORF33-بائنڈنگ ڈومین کو ORF45 کے انتہائی محفوظ کاربوکسائل ٹرمینل 19 امینو ایسڈز (AA) اور USP7-بائنڈنگ ڈومین کو ORF45 کے وسطی علاقے میں اطلاع شدہ اتفاق رائے سے نقشہ بنایا۔امیونو فلوروسینس سٹیننگ کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے ORF33 یا USP7 کے ساتھ ORF45 کو منتقلی کنڈٹ آئنوں کے تحت اور KSHV سے متاثرہ خلیوں میں جمع کرنے کا مشاہدہ کیا۔مزید یہ کہ، ہم نے ORF45 پر منحصر ORF33/USP7 کے ایک حصے کی نیوکلئس سے سائٹوپلازم تک دوبارہ لوکلائزیشن کو دیکھا۔ہم نے پایا کہ ORF45 کی وجہ سے ORF33 پروٹین کے جمع ہونے میں اضافہ ہوا جسے ختم کر دیا گیا تھا اگر ORF33- یا ORF45 میں USP7 بائنڈنگ ڈومین کو حذف کر دیا گیا تھا۔مزید برآں، KSHV جینوم میں ORF45 کے محفوظ کاربوکسائل ٹرمینس کو حذف کرنے سے KSHV سے متاثرہ خلیات میں ORF33 پروٹین کی سطح میں زبردست کمی واقع ہوئی اور نسلی وائرس کی پیداوار کو ختم کر دیا۔اجتماعی طور پر، ہمارے نتائج نہ صرف ORF45 انٹرایکوم کے نئے اجزاء کو ظاہر کرتے ہیں، بلکہ یہ بھی ظاہر کرتے ہیں کہ ان پروٹینز کے درمیان تعامل KSHV lytic نقل کے لیے اہم ہیں۔ Kaposi's sarcoma-essociated herpesvirus (KSHV) کئی انسانی کینسروں کا سبب بنتا ہے۔KSHV ORF45 ایک ملٹی فنکشنل پروٹین ہے جو KSHV لائٹک ریپلیکیشن کے لیے درکار ہے، لیکن وہ درست طریقہ کار جن کے ذریعے ORF45 اپنے اہم کام انجام دیتا ہے واضح نہیں ہے۔ہمارے پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ خلیوں میں تمام ORF45 pr otein اعلی مالیکیولر-وزن کمپلیکس میں موجود ہیں۔لہذا ہم نے لائٹک نقل کے دوران اس کے کردار کے بارے میں بصیرت فراہم کرنے کے لئے ORF45 کے انٹرایکوم کو نمایاں کرنے کی کوشش کی۔مونوکلونل اینٹی باڈیز کے پینل کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے KSHV سے متاثرہ خلیوں میں ORF45 انٹرایکوم کا سروے کیا۔ہم نے ORF45 کے دو نئے پابند شراکت داروں کی نشاندہی کی: وائرل پروٹین ORF33 اور سیلولر ubiquitin-specific protease 7 (USP7)۔ہم مزید یہ ظاہر کرتے ہیں کہ ORF45 اور ORF33 کے درمیان تعامل KSHV وائرل ذرات کی موثر پیداوار کے لیے اہم ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ اس تعامل کے ساتھ ہدفی مداخلت KSHV لائٹک نقل کو روکنے کے لیے ایک نئی حکمت عملی کی نمائندگی کر سکتی ہے۔