مصنوعات

کولیسن E1 چینل ڈومین کی جھلی ٹوپولوجی کا مطالعہ فلوروسینس ریزوننس انرجی ٹرانسفر (FRET) کے ذریعے کیا گیا۔FRET میں عطیہ دہندہ کے طور پر جینیاتی طور پر انکوڈ شدہ فلوروسینٹ امینو ایسڈ (کومارین) شامل تھا اور FRET قبول کنندہ کے طور پر DABMI (4-(dimethylamino) phenylazophenyl-4'-maleimide) کے ساتھ منتخب طور پر لیبل لگا ہوا سیسٹین کی باقیات شامل تھیں۔فلوروسینٹ کومارین کی باقیات کو ایک آرتھوگونل tRNA/aminoacyl-tRNA سنتھیٹیس جوڑی کے ذریعے پروٹین میں شامل کیا گیا تھا جس نے کولیسن چینل ڈومین کے اندر کسی بھی سائٹ میں انتخابی شمولیت کی اجازت دی۔ہر ویریئنٹ نے کومارین انکارپوریشن کے لیے ایک اسٹاپ (TAG) میوٹیشن اور DABMI منسلکہ کے لیے ایک سسٹین (TGT) میوٹیشن کا سہارا لیا۔گھلنشیل اور جھلی سے منسلک دونوں حالتوں کے لئے FRET تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے ہیلیکس 1-6 کے اندر چھ باہمی فاصلے طے کیے گئے تھے۔FRET ڈیٹا نے جھلیوں کی ایسوسی ایشن پر 3-6 ہیلائسز کے درمیان انٹر ہیلیکل فاصلوں میں بڑی تبدیلیاں دکھائیں جو چینل ڈومین کی جھلی سے منسلک ڈھانچے میں نئی ​​بصیرت فراہم کرتی ہیں۔عام طور پر، coumarin-DABMI FRET انٹرہیلیکل افادیت جھلی بائنڈنگ پر، کولیسن چینل کے لیے چھتری کے ماڈل کی بنیاد پر کم ہو گئی۔چینل ڈومین کی بند حالت کے لیے ایک عارضی ماڈل موجودہ اور پہلے شائع شدہ FRET ڈیٹا کی بنیاد پر تیار کیا گیا تھا۔یہ ماڈل ایکسٹرا سیلولر سائیڈ سے گھڑی کی سمت میں ہیلائسز 1-7 کا سرکلر ترتیب تجویز کرتا ہے اور ہیلیکس 1، 6، 7، اور 10 کی جھلیوں کے انٹرفیشل ایسوسی ایشن کے ارد گرد مرکزی ٹرانس میبرن ہیرپین کے ارد گرد 8 اور 9 کی تشکیل ہوتی ہے۔