مصنوعات

انسانی آنتوں کے سمبینٹ میں الفا میننوسیڈیسس کے Ca2+ پر منحصر خاندان کی میکانکی بصیرت۔

کالونک بیکٹیریا، جس کی مثال Bacteroides thetaiotaomicron ہے، گلائکوسائیڈ ہائیڈرولاسیس (GHs) کے بڑے خاندانوں کو غذائی پولی سیکرائڈز اور میزبان گلائکین کو غذائی اجزاء کے طور پر استعمال کرنے کے لیے استعمال کرکے انسانی صحت کو برقرار رکھنے میں کلیدی کردار ادا کرتے ہیں۔اس طرح کے GH خاندان کی توسیع کی مثال B. thetaiotaomicron جینوم کے ذریعہ انکوڈ شدہ 23 خاندانی GH92 glycosidases سے ملتی ہے۔یہاں ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ یہ الفا میننوسیڈیسس ہیں جو میزبان N-glycans کو استعمال کرنے کے لیے ایک واحد نقل مکانی کے طریقہ کار کے ذریعے کام کرتے ہیں۔دو GH92 mannosidases کا سہ جہتی ڈھانچہ دو ڈومین پروٹینوں کے خاندان کی وضاحت کرتا ہے جس میں کیٹلیٹک سینٹر ڈومین انٹرفیس پر واقع ہے، جو ایک Ca(2+) میں ہائیڈولیسس کے لیے تیزاب (گلوٹامیٹ) اور بیس (ایسپارٹیٹ) مدد فراہم کرتا ہے۔ منحصر طریقہ.inhibitors کے ساتھ کمپلیکس میں GH92s کے تین جہتی ڈھانچے کیٹالیسس کی خصوصیت، طریقہ کار اور تعمیری سفر کے بارے میں بصیرت فراہم کرتے ہیں۔Ca(2+) مینوسائیڈ کو اس کی زمینی حالت (4)C(1) کرسی کی تبدیلی سے دور منتقلی حالت کی طرف بگاڑنے میں مدد کرنے میں کلیدی اتپریرک کردار ادا کرتا ہے۔ (کتابیات: نیٹ۔کیمبائول6، 125-32، (2010)

کونکناولین A-sepharose کالم پر اوولبومین گلائکواسپراگائنس کی فرنٹل ایفینیٹی کرومیٹوگرافی۔لیکٹین کی پابند خصوصیت کا ایک مقداری مطالعہ۔

Sepharose 4B-immobilized concanavalin A (ConA) کے تعامل کو اوولبومین سے حاصل کردہ 10 گلائکواسپارگین کے ساتھ فرنٹل وابستگی کرومیٹوگرافی کے ذریعہ مقداری طور پر جانچا گیا۔اس طریقہ میں، ایک کاربوہائیڈریٹ محلول کو مسلسل ایک ConA-Sepharose کالم پر لگایا جاتا ہے اور elution فرنٹ کی retardation کو تعامل کی طاقت کے پیرامیٹر کے طور پر ماپا جاتا ہے۔ConA کے ساتھ ہر ایک سیکرائیڈ کے لیے انحطاط مستقل (Kd) کا تعین کیا جا سکتا ہے۔p-nitrophenyl-alpha,D-mannoside کے بائنڈنگ کے تجزیہ سے معلوم ہوا ہے کہ Sepharose 4B پر غیر متحرک ہونے کے بعد ConA کی بائنڈنگ خصوصیات بنیادی طور پر تبدیل نہیں ہوتی ہیں۔تجزیہ کے لیے ہر ایک اوولبومین گلائکواسپراگائنز پر ٹریٹیم کا لیبل لگا ہوا تھا۔حاصل کردہ Kd اقدار کا موازنہ ظاہر کرتا ہے کہ Glycosyl چین کے بہت ہی معمولی ساختی اختلافات کے ساتھ ConA کی پابندی کافی حد تک مختلف ہوتی ہے۔نتائج بتاتے ہیں کہ ConA ایک مخصوص گلائکوسائل چین کی ساخت، Man alpha 1-6(Man alpha 1-3)Man کو تسلیم کرتا ہے، جس میں C-6 سے منسلک ماننوز کی C-3 پوزیشن پر کم از کم ایک ہائیڈروکسیل گروپ آزاد ہونا چاہیے۔